一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

冻存条件：推荐使用无血清冻存液（货号：C7001）

传代方法：首次建议1:2传代，换液每两天一次。对于悬浮细胞，建议离心收集；贴壁细胞按常规方法处理，并用无菌离心管收集培养基，备用以便过渡培养。

二、细胞处理步骤

收到细胞后，先将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，是运输细胞的最佳办法。在处理前，使用75%酒精喷洒消毒细胞瓶，在超净台内进行严格的无菌操作。细胞瓶应放置于37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片，以便后续对比（建议拍摄40x、100x、200x的照片）。前三天拍摄的照片是重要的售后依据，若未提供照片将默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，将培养液收集至离心管，留5ml完全培养基，放入37℃、5%CO2孵箱中培养；若细胞密度超过80%，即可进行传代。
对于贴壁细胞，建议的步骤如下：

弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
加入0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞大部分变圆并脱落，快速轻敲培养瓶后加5ml以上完全培养基以终止消化。
轻轻吹打使细胞脱落后吸出，并转移至15ml离心管，1000RPM离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml完全培养基重悬。
按1:2比例分瓶传代（可分至两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5%CO2培养箱中继续培养。

对于悬浮细胞，传代方法有两个：
方法一：收集细胞，1000RPM离心8-10分钟，弃去上清液，添加1-2ml培养液，吹匀后按1:2比例分到新瓶中。
方法二：采用半数换液法，弃去一半培养基后，剩余部分细胞悬起，按1:2比例分至新瓶中。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，首先弃去培养液，用PBS洗涤一次；然后加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞变圆后加入5ml完全培养液以终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
弃去上清后，将细胞沉淀与1ml无血清冻存液（货号：C7001）混匀后放入冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，若后期转入液氮罐，需在-80℃下存放24小时以上再转入液氮中。

c. 细胞复苏

从液氮中取出冻存管时，请注意佩戴防护面具，迅速将其放入37℃水浴中解冻，待冻存管内无晶体后，用75%酒精消毒外壁。随后，将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种于T25培养瓶中，并置于37℃、5%CO2培养箱中培养。第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能因贴壁不牢而脱落。这是正常现象。如脱落较多，可以将所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清以便过渡培养。处理方式与之前的传代步骤相似，最终按比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基。

五、售后条款

关于细胞问题的再发条件与标准如下：

运输中出现问题，如细胞丢失、瓶身破损等，均可重发。
细胞污染问题需在收到产品48小时内提供实验结果，经过核实后可重发。
常温发货细胞需在静置24小时后检测，干冰发货细胞需在复苏后24小时内验证存活情况，并提供照片。
若复苏后出现污染可重发，但需在规定时间内报告。

如提交细胞活力问题，需在收到产品7天内进行检测，使用台盼蓝染色法以确认证实后可重发。

总之，确保提供完整的操作记录与细胞状态照片将有助于售后服务的顺利进行。

对于任何未符合条件的问题，将视具体情况评估处理。Z6·尊龙凯时致力于为您提供高质量的细胞培养服务，确保实验的顺利进行。