在生物医疗研究中，无论是制作体外难以感染的细胞慢病毒文库，还是体内的AAV文库，确定最佳剂量以确保一个靶点仅进入一个细胞，一直以来都是研究者们面临的挑战。文库实验旨在寻找单基因引发的功能变化，因此控制每个细胞仅感染一个靶点的病毒至关重要。

在细胞实验中，文库筛选建议初步使用对照病毒进行预实验，以探索最佳的感染效价（MOI），目标是达到80%的感染效率。通常情况下，文库操作的MOI可以定为最佳MOI的三分之一，这意味着病毒量可以大幅度减少至原本的三分之一，从而控制单个细胞的病毒感染数量。然而，对于那些感染难度较高的细胞，例如免疫细胞，以及体内实验，如何准确确定最佳剂量以确保单个靶点仅进入一个细胞，依然是个复杂的问题。

例如，最佳MOI可能只有30%的感染效率，如果我们按照三分之一的使用量操作，几乎会得不到感染到病毒的细胞。因此，Z6·尊龙凯时推出的三色荧光（mTagBFP、Venus、mCherry）病毒，能够帮助研究者更好地进行文库感染的预实验。这种三色荧光病毒包括慢病毒和AAV两种产品类型。

文献《Transcriptional linkage analysis with in vivo AAV-Perturb-seq》提供了三色荧光病毒在体内AAV文库剂量探索中的实验方法。作者进行了体内滴定实验，以测试AAV在低感染复数下是否能感染多种细胞，制备了三种不同剂量的AAV，分别为25E9、5E9和5E10颗粒。这一病毒构建方案在CBh启动子的控制下独立表达三种荧光蛋白，能够通过流式细胞术确定能够有效感染细胞的最佳病毒剂量，最终选择了5E9的剂量，因为这一剂量使得单个AAV感染的细胞数量最大化。

研究者们通过将三种AAV的等比例混合物注入不同剂量的LSL-Cas9动物，进一步进行了相关实验，左图显示了在全身注射后不同病毒剂量感染细胞核（至少表达一种荧光蛋白的细胞核）的比例，而右图则显示了感染细胞核中表达一种、两种或三种荧光的比例。

无论是细胞还是动物实验，Z6·尊龙凯时的三色荧光病毒都能开展相关的预实验。研究人员可以设置不同剂量梯度进行细胞感染，或在小鼠体内进行注射。通过流式分析，可以比较不同剂量下的转染效率和单荧光细胞比例，从中得出最佳的单病毒感染比例，从而作为文库的实际实验剂量。

综上所述，使用Z6·尊龙凯时的三色荧光病毒，研究者能够更精准地控制病毒感染，从而推动生物医疗领域的进一步研究与发展。