人非小细胞肺癌细胞HCC-827培养指南 - Z6·尊龙凯时品牌推荐

### HCC-827细胞培养指南

#### 一、细胞培养条件

**细胞名称**：HCC-827

**细胞类型**：人非小细胞肺癌细胞

**生长特性**：此细胞系具有贴壁生长的特性。

**冻存条件**：建议使用无血清冻存液（货号：C7001）进行冻结。

**培养体系**：推荐使用1640培养基，添加10% FBS。

**传代方法**：初次传代建议以1:2的比例进行，通常在2天后更换培养基。

**备注**：请使用无菌离心管收集培养基以备后续对比。如果对比实验效果不佳，建议直接选择我们提供的完全培养基。

#### 二、细胞处理流程

在收到细胞后，待其状态良好时，应将其灌满完全培养液并密封瓶口，这样是运输细胞的最佳方式。收到细胞后，请用75%酒精对细胞瓶进行消毒，然后在超净工作台中进行严格的无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态后进行后续操作。通过显微镜观察细胞的生长情况并拍摄不同放大的照片（建议分别拍摄40x、100x、200x），前三天的照片是重要的售后依据，若未提供照片则默认细胞状态良好。注意在放入培养箱时，需将瓶盖稍微松开。

#### 三、细胞培养步骤

**a、细胞传代**：

当细胞汇合度未超过80%时，需将培养液收集至离心管备份，留出5ml培养基在37℃、5%CO2的环境下培养；若细胞密度超过80%，则可以进行传代，具体步骤如下：

弃去培养基，使用不含钙、镁离子的PBS漱洗细胞1-2次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，在37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态。当细胞大部分变圆并脱落时，及时轻敲培养瓶，然后加入5ml以上的完全培养基以终止消化。
轻轻吹打以确保细胞完全脱落，然后将悬液转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清并用1-2ml完全培养基重悬细胞。
按1:2的比例将细胞悬液分瓶（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

**b、细胞冻存**：

当细胞覆盖培养瓶80%面积时，弃去培养液，用PBS清洗一次。
添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，翻转培养瓶观察，待细胞缩回并变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，将悬液转移至15ml离心管中并以1000rpm离心5分钟。
弃去上清后，将细胞沉淀与1ml无血清冻存液（货号：C7001）混匀并转入冻存管。
将冻存细胞直接存放于-80℃冰箱中，若需将其转入液氮罐，需在-80℃保存至少24小时后再转入液氮罐。

**c、细胞复苏**：

从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置于37℃水浴中解冻，直到没有结晶。用75%酒精擦拭冻存管外壁。
将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000rpm离心5分钟。
弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，并放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。
第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

#### 四、注意事项

某些细胞可能在运输过程中因不牢固而脱落，这属于正常现象。请将所有培养液收集至离心管，1000rpm离心5分钟以收集上清作为过渡培养。添加1-2ml胰蛋白酶，轻轻吹打并重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例分瓶传代（两个T25），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

#### 五、售后条款

**1）细胞出现问题，可重发的情况**：

细胞在运输过程中出现丢失、瓶身破损、培养液泄漏等情况，均可申请重发。
若细胞收到48小时内发生污染问题，请提供真实的实验结果予以核实，符合条件可重发。
常温运输的细胞静置24小时后，干冰冻存的细胞复苏后24小时内多数细胞未存活，请提供细胞状态照片以申请重发。
干冰运输的细胞复苏或常温运输的细胞未开封静置后出现污染，均可申请重发。
如细胞活性问题，请在收到产品7天内提供鉴定结果，良好者可重新发货。
在收到细胞的当天及第2、3天请拍照，若3天内未告知，则视为产品合格。若在4-7天内出现问题，请提供前3天照片及处理步骤，由技术人员判定责任，决定重发。

**2）细胞出现问题，不予重发的情况**：

客户造成的细胞污染，恕不重发；
因客户操作不当导致细胞状态不佳，恕不重发；
非推荐的细胞培养体系引起的细胞状态问题，恕不重发；
细胞状态不佳，未提供培养前3天照片的，恕不重发；
细胞培养过程中若有其他处理，恕不重发；
收到后在2天内未反馈的问题，恕不重发；
视个案情况而定。

在您的细胞培养过程中，选择Z6·尊龙凯时的优质服务，以获得最佳的实验效果和售后保障。