Z6·尊龙凯时人前列腺癌细胞VCAP培养指南

一、细胞培养条件

细胞的适宜培养条件为37℃，5% CO2的湿润环境。

二、细胞接收及处理

收到细胞后，应使用75%酒精对整个细胞瓶进行消毒，并在超净工作台内进行严格的无菌操作。随后，将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以恢复细胞状态。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议每个倍数至少拍摄一张：40x、100x、200x）。前三天的照片将作为重要的售后依据，如未提供，将默认收到的状态良好。

在传代后建议将一瓶细胞用原瓶的完全培养基培养，另一瓶则使用自行配制的完全培养基，以便对比。更换培养液时，瓶盖可以适当松动。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集培养瓶内的完全培养液至离心管中，留5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养。当细胞密度超过80%时，进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml 0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞变化。若细胞大部分变圆并脱落，迅速返回操作台，轻敲培养瓶后加足够的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），再补充新培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液并用PBS清洗一次。
2. 加入约1ml 0.25%胰蛋白酶消化液，静置并观察，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打细胞后转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml Z6·尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存管置于-80℃冰箱中保存。如需转入液氮罐中，需在-80℃冰箱中存放超过24小时再转入液氮罐。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至无冰晶出现，然后用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，并接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会发生脱落，这是正常现象。如大部分细胞脱落，可将培养液收集至离心管，进行1000RPM离心5分钟，收集上清以作过渡培养。通过加胰酶处理以重悬细胞后，可再进行分瓶传代。

五、售后条款

1）可重发的情况

1. 运输途中产生的细胞丢失、瓶身破损、培养液严重漏液等问题可重发。
2. 如收到的细胞污染，请在48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温运输细胞静置24小时后或干冰冻存细胞复苏24小时后若绝大多数细胞未存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 如在规定时间内复苏后的细胞出现污染，可重发。
5. 细胞活性问题需在7天内提供真实结果，用台盼蓝染色法鉴定，核实后可重发。
6. 收到当天及第二、三天需拍照，未告知视为合格。如果在4-7天内出现问题，有提供前三天照片及详细操作步骤，与技术人员沟通确定为责任方的可重发。

2）不予重发的情况

1. 由客户造成的细胞污染，将不予重发。
2. 若因客户不当操作导致细胞状态不佳，将不予重发。
3. 非推荐的细胞培养体系导致细胞状态不良，将不予重发。
4. 未提供前三天细胞培养照片的，将不予重发。
5. 细胞培养过程中进行其他处理的，将不予重发。
6. 收到后2天内未告知情况，将不予重发。
7. 其他情况视具体情况而定。

通过Z6·尊龙凯时提供的这套细胞培养与冻存的方案，旨在帮助您更好地进行细胞实验，如有任何问题，请随时与我们联系。