Z6·尊龙凯时的大鼠肝星形细胞THSC培养说明书旨在为研究人员提供清晰的细胞培养指导，以确保实验的成功。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肝星形细胞THSC

生长特性：细胞易于培养，适合多种实验条件

冻存条件：使用无血清冻存液

培养体系：DMEM

传代方法：首次建议以1:2的比例进行传代

传代情况：每2天更换培养液

备注：请使用无菌离心管收集培养基，留作过渡对比培养。如果对比培养效果欠佳，建议直接购买Z6·尊龙凯时的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

在细胞状态良好时，建议将其灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输过程中最佳的保存方式。在收到细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5%CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。使用显微镜观察细胞生长情况，并拍照留存（建议拍摄40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要的售后依据。如未提供照片，则默认细胞状态良好。传代后，建议一瓶使用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基进行对比，换液时请将瓶盖拧松。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代：

如果细胞未超过80%的汇合度，将培养液收集至离心管，并留5ml完全培养基，于37℃、5%CO2培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况。如果细胞变圆并开始脱落，迅速取回操作台，轻敲培养瓶后加入5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次细胞。
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察至细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后，加入1mlZ6·尊龙凯时的无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中。如果后期需转入液氮罐，则需在-80℃冰箱保存24小时以上再进行转移。

c. 细胞复苏：

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，待冻存管中无结晶后，用75%酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5%CO2培养箱中。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能会发生脱落。这是正常现象。如脱落细胞较多，可将培养瓶中的培养液收集至离心管中，在1000rpm下离心5分钟，收集上清用于过渡培养。之后混合胰酶1-2ml，轻轻吹打重悬，并消化1-2分钟后，加5ml完全培养基终止反应。再离心，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬，按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后置于37℃、5%CO2培养箱中培养。

五、售后条款

细胞出现问题时可重发的情况包括：

1. 在运输过程中出现细胞丢失、瓶身破损或培养液严重泄漏的情况。
2. 细胞污染问题，如需提供真实实验结果并在收到产品48小时内通知我们。
3. 常温发货的细胞静置24小时后，干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若未存活（需提供清晰的细胞状态照片）。
4. 若复苏后24小时内或常温发货细胞静置4小时且未开封出现污染。
5. 在收到产品7天内提供真实实验结果以鉴定细胞活力。
6. 在收到当天及第2、3天拍照记录，若超期未告知则视为合格产品。

细胞出现问题但不予重发的情形包括：

1. 因客户原因造成的细胞污染。
2. 因客户不当操作导致细胞状态不良。
3. 使用非推荐的细胞培养体系造成的不良状态。
4. 在未提供细胞培养前3天照片的情况下。
5. 细胞通过其他方式进行处理后。
6. 在收到后2天内未告知的。
7. 具体情况具体分析。

通过以上步骤和注意事项，相信您在使用Z6·尊龙凯时的大鼠肝星形细胞THSC进行研究时能够获得理想的实验效果！